コロニーカウンター ProtoCOL3 アプリケーションオプソニン作用アッセイ(OPKA)
オプソニン作用アッセイ(OPKA)とは？
オプソニン作用アッセイ(OPKA)はワクチン、特に肺炎球菌ワクチンの開発と改善において重要な役割を果たす試験で、肺炎球菌抗体の酵素免疫測定法(ELISA)への有用な追加アッセイとなっています。
このアッセイは、血清サンプルに存在するオプソニン抗体活性を定量化するために実施されます。
ワクチン誘導抗体が効率的な補体沈着と、その後のオプソニン食作用による死滅を促進するかどうかを実証することにより、有望なワクチンの選択を支援します。
ワクチン接種を受けた個人とワクチン接種を受けていない個人の血清の食作用力価を再現性よく推定することができるアッセイとなっています。
効果的なオプソニン化は、細菌の食細胞死を仲介します。 アッセイを実施するために、細菌株を血清および補体とともに培養します。
次に培地上に様々な希釈倍率の細菌培養物を塗抹し、一晩培養します。
培地上に存在するコロニーの数を対照と比較し、血清の細菌による死滅の割合を評価します。
このアッセイは、血清サンプルに存在するオプソニン抗体活性を定量化するために実施されます。
ワクチン誘導抗体が効率的な補体沈着と、その後のオプソニン食作用による死滅を促進するかどうかを実証することにより、有望なワクチンの選択を支援します。
ワクチン接種を受けた個人とワクチン接種を受けていない個人の血清の食作用力価を再現性よく推定することができるアッセイとなっています。
効果的なオプソニン化は、細菌の食細胞死を仲介します。 アッセイを実施するために、細菌株を血清および補体とともに培養します。
次に培地上に様々な希釈倍率の細菌培養物を塗抹し、一晩培養します。
培地上に存在するコロニーの数を対照と比較し、血清の細菌による死滅の割合を評価します。
図1. ProtoCOL3で測定されたオプソニン作用アッセイプレートの前後の画像例
ProtoCOL3による自動測定
OPKAのプレートはProtoCOL3のオプションにて測定する事ができます。
OPKAにおいて、ワクチンの有効性の基礎となるデータを提供するためには正確なコロニー数を取得することが不可欠です。
従来の方法ではライトボックスとペンを使用したマニュアルカウントでコンピューターに入力する必要がありましたが、ProtoCOL3では正確なカウントする事が可能です。 さらにProtoCOL3ではコロニー数と共にプレートのデジタル画像が保存されるため、新しいワクチンの承認に不可欠な監査の準備作業が改善されます。
Putman, M., Burton, R. & Nahm, MH. (2005)による研究では、ProtoCOL3による精度を手動カウントと比較しており、 結果は読み取り時間や文字起こしエラーなど、従来の測定方法に関連する多くのハードルを克服する能力をProtoCOL3が有している事を実証しました。
ProtoCOLではOPKAのプレートを、単一の列から12 x12グリッドまでの様々な形式で測定する事ができます。
測定の感度を変更したり、選択したサイズ(mm)に基づいて残渣や破片を除外する事もできます。
密接に重なっている重複コロニーを分割することもでき、コロニー密度の高い領域でも正確な測定をする事ができます。
コロニーは色・サイズ・形状に基づいて分類する事ができ、色分類では最大20色の異なる色を検出でき、43 µmの小さいコロニーを検出する事もできます。
※Putman, M., Burton, R. & Nahm, MH. (2005).
Simplified method to automatically count bacterial colony forming unit. Journal of Immunological Methods. 302. 99-102.
OPKAにおいて、ワクチンの有効性の基礎となるデータを提供するためには正確なコロニー数を取得することが不可欠です。
従来の方法ではライトボックスとペンを使用したマニュアルカウントでコンピューターに入力する必要がありましたが、ProtoCOL3では正確なカウントする事が可能です。 さらにProtoCOL3ではコロニー数と共にプレートのデジタル画像が保存されるため、新しいワクチンの承認に不可欠な監査の準備作業が改善されます。
Putman, M., Burton, R. & Nahm, MH. (2005)による研究では、ProtoCOL3による精度を手動カウントと比較しており、 結果は読み取り時間や文字起こしエラーなど、従来の測定方法に関連する多くのハードルを克服する能力をProtoCOL3が有している事を実証しました。
ProtoCOLではOPKAのプレートを、単一の列から12 x12グリッドまでの様々な形式で測定する事ができます。
測定の感度を変更したり、選択したサイズ(mm)に基づいて残渣や破片を除外する事もできます。
密接に重なっている重複コロニーを分割することもでき、コロニー密度の高い領域でも正確な測定をする事ができます。
コロニーは色・サイズ・形状に基づいて分類する事ができ、色分類では最大20色の異なる色を検出でき、43 µmの小さいコロニーを検出する事もできます。
※Putman, M., Burton, R. & Nahm, MH. (2005).
Simplified method to automatically count bacterial colony forming unit. Journal of Immunological Methods. 302. 99-102.
図2. ProtoCOL3ソフトウェアのOPKAプレートの測定条件例
ProtoCOL3のコンプライアンス対応
測定データはトレーサビリティのために安全なSQLデータベースに保存され、スプレッドシート(Excel / Open Office)、PDFまたはLIMSに転送できます。
手動での入力ミスやデータ転送エラーの心配がなくなり、追跡可能な一貫した結果データが生成されます。
ソフトウェアはGLPおよびGDPに準拠しており、21 CFR Part11環境下で使用する事ができます。
OPKAプレートから得られた結果は、欧州医薬品管理局(EMEA)や食品医薬品局(FDA)などの規制当局に提示できるGCP(Good Clinical Practice)ガイドラインに準拠しており、
ユーザーアクセスレベルと、ユーザーのログインおよびログアウト履歴を含む完全な監査証跡が含まれます。
これらのアーカイブされた結果は、規制当局による監査用のレポートの生成に適しているため、高度に規制された微生物学の研究所における使用にも適しています。
ProtoCOL 3のユーザー権限により、管理者は各権限グループの作業者がソフトウェア内で実行できるアクションを指定する事ができます。
これにより、作業者による偶発的な変更や削除のリスクを排除する事ができます。
メーカーであるSynbiosisは、年2回のソフトウェアアップのグレードを無料で提供しています。
手動での入力ミスやデータ転送エラーの心配がなくなり、追跡可能な一貫した結果データが生成されます。
ソフトウェアはGLPおよびGDPに準拠しており、21 CFR Part11環境下で使用する事ができます。
OPKAプレートから得られた結果は、欧州医薬品管理局(EMEA)や食品医薬品局(FDA)などの規制当局に提示できるGCP(Good Clinical Practice)ガイドラインに準拠しており、
ユーザーアクセスレベルと、ユーザーのログインおよびログアウト履歴を含む完全な監査証跡が含まれます。
これらのアーカイブされた結果は、規制当局による監査用のレポートの生成に適しているため、高度に規制された微生物学の研究所における使用にも適しています。
ProtoCOL 3のユーザー権限により、管理者は各権限グループの作業者がソフトウェア内で実行できるアクションを指定する事ができます。
これにより、作業者による偶発的な変更や削除のリスクを排除する事ができます。
メーカーであるSynbiosisは、年2回のソフトウェアアップのグレードを無料で提供しています。
図3. OPKAプレートで測定された測定結果のPDFレポート例
